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東富龍之免疫T細胞完全無血清、規模化放大培養用培養基

前      言
       2021年6月22日,中國國家藥監局公示,復星凱特CAR-T細胞治療產品阿基侖賽注射液(奕凱達?,代號:FKC876)正式獲得批準。8月17日,中國國家藥監局藥品審評中心(CDE)公示,由復星凱特申報的阿基侖賽注射液被納入突破性治療藥物程序,擬用于治療接受過二線或以上系統治療后復發或難治性惰性非霍奇金淋巴瘤。復星凱特CAR-T細胞治療產品是中國首個獲得國家藥品監督管理局批準上市的嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞藥品,開啟了中國腫瘤細胞治療新未來。
       我國對免疫細胞治療產品實行雙軌制監管。在藥品化監管方向,2017年12月22日,原國家食藥總局發布《細胞治療產品研究與評價技術指導原則(試行)》,其指出:“細胞治療產品可按照藥品管理相關法規進行研發和注冊申報”,并在藥學研究、非臨床研究、臨床研究等方面進行了細化的規范指導,該法規標志著我國正式開啟細胞治療產品的注冊上市流程。此后,又相繼出臺了一系列法規,對細胞治療的藥品管理法規進行進一步完善,基本實現細胞治療產品從醫療技術向藥品的轉化,奠定了細胞治療藥品化的基礎。目前,據不完全統計,國內有近70款免疫細胞治療技術IND申報獲得受理,被批準臨床實驗,截至目前國內所有獲批項目均為基于T細胞的免疫細胞治療產品,其中CAR-T藥物有62個。在適應癥方向絕大多數針對血液系統腫瘤,CAR-T靶點方面,大部分為CD19 ,其次是BCMA及GPC3、Claudin18.2等。
       細胞治療產品藥品化生產標志著細胞產品生產方式的巨大轉變,細胞產品的生產與質量控制體系需要根據GMP藥品法規進行改革,針對生產過程中的關鍵因素,人、機、物、法、料、環的管控以及各個制備生產階段,都需要按照GMP法規進行適應性變化。因此,細胞治療產品藥品化生產是對細胞治療產品的系統性挑戰,是細胞生產作業方式的全面、系統、規范化的升級改革。如何確保法規符合性,滿足作為藥品的嚴格質量控制與安全性評價并同時符合成本控制及規模化生產要求是每個細胞治療機構面臨的共同問題,更關乎如何在眾多的競爭對手中脫穎而出,順利通過研發、IND申報、臨床試驗,并最終上市。

一、制備工藝與關鍵試劑
在制備工藝及關鍵物料上,對于工藝過程所用試劑各相關法規做了嚴格一致的要求。2020年9月30日,國家藥品監督管理局藥品審評中心發布了《免疫細胞治療產品藥學研究與評價技術指導原則(征求意見稿)》,指出:
“盡量避免使用具有潛在致敏性的材料,如某些動物血清、特定蛋白質、血型物質、β-內酰胺類抗生素(如青霉素)等。盡量避免使用動物源性材料,盡可能用規定組成成分的非動物源性試劑替代。如果必須使用動物來源原材料,需要提供相關的研究資料說明使用的必要性和合理性,并針對原材料的物種來源、生產地區、生產工藝建立完整的質控體系,評估 TSE/BSE 安全性風險,并對終產品中的動物源材料殘留量進行檢測及開展安全性風險評估。嚴禁使用疫病流行區來源的動物血清,不得使用未經過安全性驗證的血清。如生產過程使用自體血清或自體血漿,應說明血清/血漿的生產工藝,并對包裝、存放條件和時間等進行研究。如果使用同種異體血清,其使用的原則與安全性風險控制要求參考上述動物來源原材料的要求,使用中重點關注人源外源因子的風險監控和不同來源、不同批次血清質量差異可能對產品生產過程產生的影響。人源性材料(如白蛋白、免疫球蛋白等)可以參考血液制品的質量要求和檢測方法”。
毋庸置疑,培養基是很關鍵的試劑。為了保證產品的安全性及質量品質,需求的不僅僅是無血清培養基,而是無血清、無人/動物源性的培養基,并滿足規模化放大培養要求。

二、MCMCulLymT-SFM10--T淋巴細胞無血清培養基

圖1 T淋巴細胞無血清培養基

MCMCulLymT-SFM10(圖1)是東富龍生物試劑隆重推出的,專用于人T淋巴細胞懸浮擴大培養的無血清培養基,技術配方優越,其化學成分明確,不含動物及人源性蛋白成分,蛋白含量低。可廣泛適用于各種培養工藝(靜置培養,生物反應器下的流加及灌流模式培養等)下的T細胞(CAR-T及TCR-T等)體外個性化/規模化無血清懸浮擴增培養。

T淋巴細胞無血清培養基產品優勢

● 成分明確,不含動物及人源性蛋白成分,蛋白含量低,安全性高;

● 完全支持無血清培養,不需添加血清或血清替代物,適應于生物反應器放大培養。

● 擴增能力強,支持T淋巴細胞體外高倍快速增殖;

● 支持T細胞體外長期擴增,可達21天以上;

● 培養工藝適應性好,經過多種不同培養體系驗證,如培養瓶/袋靜置培養及一次性生物反應器下流加及灌流培養模式等,配套有培養工藝技術支持;

● cGMP標準生產,采用一次性生產技術工藝,產品品質可靠,性能穩定,一致性高。

三、MCMCulLymT-SFM10應用于T細胞擴增培養效果展示

3.1 MCMCulLymT-SFM10與進口T淋巴細胞無血清培養基靜置培養對比

3.1.1 MCMCulLymT-SFM10完全無血清培養(不添加血清/血清替代物)(圖2)


圖2  MCMCulLymT-SFM10完全無血清培養效果

(不添加血清/血清替代物)

3.1.2 MCMCulLymT-SFM10+5%CT培養(圖3)



圖3 MCMCulLymT-SFM10+5%CT培養效果

3.1.3 MCMCulLymT-SFM10+5%FBS培養(圖4)


圖4 MCMCulLymT-SFM10+5%FBS培養效果

3.1.4 綜合對比

綜合對比如(圖5-圖8)



圖5 不同培養體系T細胞培養效果--VCD



圖6 不同培養體系T細胞培養效果--活性




圖7 不同培養體系T細胞培養效果--擴增倍數




圖8 不同培養體系T細胞培養效果--平均二倍時間

3.2 MCMCulLymT-SFM10靜置培養評價:

MCMCulLymT-SFM10適應于完全無血清培養,不需要添加任何血清或者血清替代物,對比進口培養基A,細胞活性及擴增速度均有優勢。

MCMCulLymT-SFM10完全無血清培養效果優于進口培養基A及進口培養基A+5%CT/FBS的培養效果。當添加5%血替CT或FBS時,可進一步提高MCMCulLymT-SFM10的培養效果。

MCMCulLymT-SFM10不需要配合血清替代物及血清,單獨使用即可高效進行T細胞擴增培養,真正意義上實現T細胞體外無血清高效擴增培養,有利于節省成本、提高效率及產品安全性。

四、MCMCulLymT-SFM10應用于T淋巴細胞規模化培養

4.1 MCMCulLymT-SFM10在10L生物反應器規模化放大培養效果如(圖9-圖11)




圖9 MCMCulLymT-SFM10在CES-10L規模化培養效果1



圖10 MCMCulLymT-SFM10在在CES-10L規模化培養效果2


圖11 MCMCulLymT-SFM10在CES-10L規模化培養效果3

4.2 MCMCulLymT-SFM10在25L生物反應器規模化放大培養如(圖12-圖14)

注:實驗所使用細胞在接種時,前期已經培養17天。



圖12 MCMCulLymT-SFM10在CES-25L規模化培養效果1



圖13 MCMCulLymT-SFM10在CES-25L規模化培養效果2



圖14 MCMCulLymT-SFM10在CES-25L規模化培養效果3

4.3 MCMCulLymT-SFM10生物反應器規模化放大培養評價:

MCMCulLymT-SFM10無血清培養基支持生物反應器條件下T細胞完全無血清培養,可適應于不同放大體系規模(10L,25L),是T細胞規模化放大培養的可靠選擇,可有效提高細胞品質及安全性。特別針對一次性培養體系,可解決因添加血清或血清替代物可能導致引起絮狀物產生進而對細胞產生不利影響的問題。

五、MCMCulLymT-SFM10無血清培養基

MCMCulLymT-SFM10無血清培養基其化學成分明確,不含動物及人源性蛋白成分,蛋白含量低。可廣泛適用于各種培養工藝(靜置培養,生物反應器下的流加及灌流模式培養等)下的T細胞(CAR-T及TCR-T等)體外個性化/規模化無血清懸浮擴增培養。

在培養過程中,支持完全無血清培養,不需要添加血清及血清替代物。完全無血清培養體系符合法規對細胞培養過程的安全性及質量品質要求,有效解決培養過程因引入外源物質導致的安全性及穩定性風險,是免疫T細胞擴增培養的可靠選擇。

參考文獻

[1]中國國家藥監局藥品審評中心(CDE).Retrieved Aug 9,2021

[2]《細胞治療產品研究與評價技術指導原則(試行)》2017年12月

[3]《免疫細胞治療產品藥學研究與評價技術指導原則(征求意見稿)》2020年9月

注:

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上海東富龍生物試劑有限公司簡介
       上海東富龍生物試劑有限公司是東富龍科技集團股份有限公司的全資子公司,聚焦于生命科學研究及生物技術產業,集關鍵試劑的研發創新、應用轉化及生產銷售為一體,致力于打造成為國內外領先的國產化生物試劑研發生產綜合供應平臺,為生命科學研究及生物技術開發生產提供全線關鍵試劑應支持。在大分子藥生產領域,為生物技術研發生產提供培養基系列相關產品。在細胞與基因治療領域,為細胞與基因治療技術(CAR-T\TCR-T\NK等免疫細胞與干細胞治療技術等),提供全流程關鍵試劑整體解決方案。生物試劑是東富龍系統解決方案的重要組成部分,生物試劑產品同東富龍核心裝備、系統工程工程及一次性耗材相結合,形成生命科學及生物制藥產業支持的系統性解決方案閉環。上海東富龍生物試劑有限公司依托東富龍集團及醫療產業基礎,集東富龍系統化平臺優勢及全球優質客戶資源與專業技術支持服務能力,打造國際領先的國產化試劑品牌,實現關鍵生物試劑國產化。
技術研發與支持平臺
       上海東富龍生物試劑有限公司下屬東富龍生物細胞實驗室是生物技術開發支持平臺,平臺配備完備的功能工作區、設施設備條件以及專業技術工藝人員(具備干細胞、免疫細胞及工程細胞培養技術開發與支持能力),是關鍵試劑研發支持平臺,同時也是生物技術開發轉化平臺,配套東富龍關鍵試劑、核心裝備及耗材提供生物技術應用技術開發與支持,依托東富龍專業技術能力及行業法規的深入理解,在提供產品的同時,可提供最貼近實際工藝及技術規范要求的應用技術服務支持。
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